畜禽養(yǎng)殖場作為動物疫病傳播的源頭,在疫病發(fā)生時及時進行病原診斷,采取相應的應對措施,是目前動物疫病防控的關鍵環(huán)節(jié)。
目前國內動物疫病的病原學診斷試劑選擇范圍有限。而在通用的血清學檢測試劑中,絕大多數(shù)是檢測血清中抗體的免疫試劑,其結果更多反應了疫苗免疫效果,對病原感染只能間接分析,無法確診,何況動物在遭受感染后,病毒要在體內潛伏一段時間,動物才會產(chǎn)生抗體,檢測結果往往滯后病原感染。能對野毒感染進行鑒別的成熟抗體檢測試劑只有豬偽狂犬的gE抗體試劑盒,由于疫苗的純化工藝問題,口蹄疫的非結構蛋白的抗體目前無法產(chǎn)生理論上的鑒別診斷作用。另一方面能監(jiān)測疫病病原的試劑的商品化試劑偏少。免疫熒光抗體技術受限于基層養(yǎng)殖場熒光顯微鏡以及熒光標記抗體的缺乏,故在多數(shù)基層養(yǎng)殖試驗室難以普及。由于達到市場需求的特異性及靈敏度并能配對的動物疫病抗體的缺乏,免疫試劑中目前的病原檢測產(chǎn)品很少,這類產(chǎn)品開發(fā)的周期長,不確定性很大,很難應對基層疫病防控的需要。因此養(yǎng)殖場試驗室亟需合適的病原學檢測試劑。
鑒于基于核酸擴增的分子診斷技術發(fā)展迅速,熒光PCR及電泳PCR已經(jīng)被農業(yè)部及各省市疫控單位逐步采用,扭轉了疫病診斷中病原診斷技術空白的態(tài)勢。但對養(yǎng)殖場基層試驗室來說,PCR分子診斷技術的使用存在不少阻礙:
1、分子診斷試劑一般要冷凍保存,成本高且運輸半徑有限;
2、核酸提取步驟復雜緩慢,基層技術人員操作困難;
3、基層單位無力購買價格偏高的PCR擴增儀,基層技術人員也不容易掌握儀器操作要領。因為這些難點的存在,分子診斷技術一直沒有在我國養(yǎng)殖基層試驗室普及。
快靈生物開發(fā)的基因試紙卡,開啟了現(xiàn)場分子診斷步入養(yǎng)殖場的新時代。它包括基因提取試劑、恒溫擴增試劑及免疫層析試紙卡三部分,能常溫運輸;在常溫下同時完成
DNA/RNA樣品提取,僅需微型離心機或專利磁力架10分鐘內完成操作;添加樣品模板后將反應管密閉后放置在變溫金屬浴上保溫60分鐘,擴增完成后將反應管插入試紙卡槽后一步按壓就啟動溶液層析,3-5分鐘后即可目視層析試紙的線條顯色判定結果。專利申請中的基因試紙卡解決了擴增產(chǎn)物溶液及其氣溶膠的泄漏污染導致后續(xù)樣品交叉污染的問題,開啟了現(xiàn)場分子診斷步入了基層養(yǎng)殖場的新時代?;蛟嚰埧苤苯訖z測到病原,很適合對健康攜毒排毒的動物進行篩查,也適合對感染早期的動物進行確診,大大縮短窗口期。此外,對于罕見病原或突然爆發(fā)的新病原,只要能在基因庫中查詢到該病原的基因序列,基因試紙卡能最快在一周內研發(fā)出來。該基因試紙卡的操作過程以專利磁力架,變溫金屬浴。
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