組份濃度:1 M Tris-HCl
配制量:1 L
配制方法:
1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br /> 3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。
PH值 | 濃HCl |
7.4 | 約70ml |
7.6 | 約60ml |
8.0 | 約42ml |
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量:1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。
1M Tris-HCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0) | 100ml |
500mM EDTA(PH8.0) | 20ml |
3. 將溶液定容至1 L后,高溫高壓滅菌。
4. 室溫保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
組份濃度:1.5 M Tris-HCl
配制量:1 L
配制方法:
1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br /> 3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。
4. 將溶液定容至1 L。
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
4)3 M醋酸鈉(pH5.2)
組份濃度:3M 醋酸鈉
配制量:100ml
配制方法:
1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中,加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?br /> 2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2
3.加去離子水將溶液定容至100ml
4高溫高壓滅菌后,室溫保存。
5)PBS Buffer
組份濃度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量:1 L
配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于1 L燒杯中。
NaCl | 8g |
KCl | 0.2g |
Na2HPO4 | 1.42g |
KH2PO4 | 0.27g |
4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M醋酸銨
組份濃度:10 M 醋酸銨
配制量:100 ml
配制方法:
1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br /> 2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm濾膜過(guò)濾除菌。
4. 密封瓶口于室溫保存。
注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
7)苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)
配制方法:
1. 說(shuō)明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。
2. 配制方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 8)10%(W/V) SDS
組份濃度:10% (W/V)SDS
配制量:100ml
配制方法:
1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解
2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2
3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。
9)2 N NaOH
組份濃度:2 N NaOH
配制量:100 ml
配制方法:
1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過(guò)程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。
2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
3. 待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。
10)2.5 N HCl
組份濃度:2.5 N HCl
配制量:100 ml
配制方法:
1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。
2. 室溫保存。
11)5 M NaCl
組份濃度:5 M NaCl
配制量:1 L
配制方法:
1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至1 L后,適量分成小份。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
11)20%(W/V) Glucose
組份濃度:20% (W/V) Glucose
配制量:100 ml
配制方法:
1. 稱取20 g Glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
12)Solution I(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量:1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。
1M Tris-HCl(PH8.0) | 25ml |
0.5M EDTA(PH8.0) | 20ml |
20%Glucose(1.11M) | 45ml |
dH2O | 910ml |
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。
13)Solution II(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS
配制量:500ml
配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中
10% SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻
3.室溫保存,此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月
注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要?jiǎng)×覕嚢?
14)Solution III(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量:500 ml
配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。
KOAc | 147g |
CH3COOH | 57.5ml |
3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
15)0.5 M EDTA(pH8.0)
組份濃度:0.5 M EDTA
配制量:1 L
配制方法:
稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?br /> 3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20 g NaOH)。
注意:pH值至8.0時(shí),EDTA才能完全溶解。
4. 加去離子水將溶液定容至1 L。
5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
6. 室溫保存。
16)1 M DTT
組份濃度:1 M DTT
配制量:20 ml
配制方法:
1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過(guò)濾除菌。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。
17)10 mM ATP
組份濃度:10 mM ATP
配制量:20 ml
配制方法:
1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的25 mMTris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。
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